炸金花棋牌 异氟烷减少大鼠离体肝脏缺氧-复氧损伤,并与库普弗细胞有关

日期:2021-02-15 21:12:23 浏览量: 114

作者;李权,于伟峰,曹云飞,杨立群,陆欣,周迈涛

[摘要]目的确定异氟烷在哪个阶段减轻离体大鼠肝脏的缺氧复氧损伤及其与库普弗细胞的关系。方法取出大鼠肝脏并置于隔离的大鼠肝脏灌注装置中,并在恒压下用改良的K-lin's碳酸氢盐缓冲液灌注95%O2 / 5%CO2饱和(在有氧条件下,使用1. 2kPa,使用0. 2kPa用于缺氧,维持生理pH和温度,并实时监测灌洗液中LDH的变化。2MAC异氟烷用于缺氧,复氧和缺氧复氧时期。GdCl3选择性抑制Kupffer细胞活性。结果[1) 2MAC在缺氧-复氧阶段使用异氟烷并仅在复氧阶段使用可抑制LDH的增加,但在缺氧阶段使用时无明显作用(2) 2MAC异氟醚和/或GdCl3基团可抑制结论异氟醚主要在复氧期保护缺氧复氧肝免受损害,而异氟醚在复氧期间的保护作用可能是降低肝脏缺氧复氧后乳酸脱氢酶的增加。与抑制复氧引起的氧自由基爆发有关,其作用与库普弗细胞的活性密切相关。

[关键词]异氟烷;大鼠肝脏分离;缺氧-复氧损伤;库普弗细胞

【摘要】目的探讨异氟烷降低离体大鼠肝脏缺氧-复氧损伤过程中哪个阶段最重要及其与枯否细胞的关系。方法建立离体大鼠肝脏模型。它包括人工肺,泵华体会首页 ,压力计,流量计,恒温器,加湿器和监视器。收集大鼠肝脏并将其置于模型中。将它们用改良的Krebs缓冲液冲洗,该缓冲液用95%O2 / 5%CO2饱和,并加入10 mM葡萄糖和1%白蛋白。

将灌注压力恒定地控制在1. 2 kPa(氧化)或0. 2 kPa(缺氧)。适当保持PH和温度,并测量氧气压力或肝流量。 2MAC异氟烷分别用于缺氧AG真人 ,复氧或缺氧-复氧时期。 GdCl3被用来抑制枯否细胞的活化。结果(1) 2MAC异氟烷在离体大鼠肝脏缺氧-复氧和复氧期间均抑制LDH的释放,而在缺氧时无效。

(2) 2MAC异氟醚和GdCl3均能明显降低离体大鼠肝脏缺氧和复氧后的LDH释放。结论复氧阶段是异氟烷降低离体大鼠肝脏缺氧-复氧损伤的最重要过程。异氟醚可能通过保护肝脏功能抑制细胞外部的氧应激,这与库普弗细胞有关。

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【关键词】异氟醚;大鼠肝脏分离;缺氧-复氧损伤;枯否细胞

研究表明,肝脏缺血-再灌注损伤分为两个阶段[1]:第一阶段(再灌注后6小时内)是库普弗细胞介导的早期再灌注损伤。第二阶段(再灌注后6h)是主要由嗜中性粒细胞介导的晚期再灌注损伤。这项研究以离体无血灌流大鼠肝脏为模型,研究异氟烷如何保护肝脏免受缺氧-复氧损伤及其与库普弗细胞的关系,并排除中性粒细胞的可能影响。

1资料和方法

1. 1材料实验动物是雄性健康的Wister大鼠,体重约200-250g(军事医学科学院)。实验前将所有动物禁食24小时。实验前24小时,通过尾静脉向三氯化(GdCl 3)治疗组注射5mg / kg GdCl3 7.,对照组注射等量生理盐水。

1. 2建立孤立的大鼠肝脏灌注模型。用戊巴比妥钠麻醉腹腔并打开腹部,小心地分离肝周韧带和血管,通过下腔静脉注射50u肝素,然后迅速完成下腔静脉插管,门静脉插管和结扎肝上腔静脉和下腔静脉开始非循环性灌注,肝脏立即均匀地变成褐色。取出大鼠肝脏并将其放置在分离的大鼠肝脏灌注装置中以开始循环灌注。隔离的大鼠肝脏灌注装置由人工肺异氟醚与活性氧,动力泵,压力计,流量计,恒温保湿系统和监测系统组成。灌注液选择改良的Klin缓冲液,包括:NaCl 117mM,KCl 4. 7mM,CaCl2 1. 5mM,KH2PO4 1. 19mM,MgSO4 1. 14mM,NaHCO3 2 4. 8mM和额外的10mM葡萄糖以保持营养,添加1%牛血清白蛋白以维持胶体渗透压,用1. 2kPa进行有氧灌注,0. 2kPa进行低氧灌注,根据pH监测将pH调整为7. 35±0. 05。实时监测灌洗液中LDH水平。

1. 3在稳定20分钟循环灌注后,实验处理步骤将从零开始。 2MAC异氟烷分阶段给药:低氧期:缺氧前20分钟至再灌注前10分钟(即-20min〜50min);复氧时间:再灌注前10min至实验结束(即50〜120min);缺氧复氧时间:缺氧前20min至实验结束(即-20〜120min)。

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1. 4统计方法所有数据均表示为平均值±标准差(x±s),使用t检验或方差分析,P≤0. 05被认为具有统计学意义。

2个结果

2. 1在缺氧-复氧阶段使用2MAC异氟烷的比较对肝脏损伤的不同影响在缺氧-复氧阶段和单独用于复氧阶段的异氟烷可以显着抑制LDH水平(P

2. 2比较2MAC异氟醚和GdCl3对肝脏缺氧-复氧损伤的影响。异氟烷组异氟醚与活性氧,GdCl3组和异氟烷+ GdCl3组均显着抑制LDH水平(P

复氧0〜45min(IU / min)释放的LDH量

治疗组与缺氧复氧对照组比较,* P <0. 05,n = 7

图1 2MAC异氟烷用于肝细胞的缺氧复氧

不同阶段对肝损伤的不同作用

复氧0〜15min(IU / min)释放的LDH量

治疗组与缺氧复氧对照组比较,* P <0. 05,n = 7

图2 2MAC异氟醚和GdCl3对肝细胞缺氧复氧损伤的作用

3个讨论

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根据研究结果,我们认为异氟醚保护肝脏免受缺氧-再氧化损伤的关键是其对再氧化阶段的影响。这种作用可能与抑制KC活性有关。

如图1所示:在复氧阶段单独使用2MAC异氟烷的效果与在缺氧复氧阶段使用的相同,而在异氧阶段单独使用的异氟烷则没有明显的效果,充分表明了保护性异氟烷在复氧阶段发挥作用,与缺氧阶段无关。有人认为异氟烷降低肝细胞耗氧量的原因是它抑制了某些能量消耗反应,因此异氟烷可以通过这种机制增强肝细胞的低氧耐受性。如果这一观点成立,那么异氟醚应在缺氧时保护肝细胞活性并降低LDH水平,这显然与本实验的结果不一致。由于该实验使用的是禁食24小时的大鼠肝脏,因此无法观察到异氟烷对缺氧期间糖酵解的影响。

异氟烷在复氧阶段的保护作用可能与抑制复氧引起的氧自由基爆发有关。有人发现麻醉药可以抑制中性粒细胞中氧自由基的产生及其破坏[2,3],也证明了氟烷可以抑制单核细胞产生H2O2 [4],因此我们推测异氟烷具有氧复氧过程中降低氧气压力的效果。

如图2所示,在GdCl3抑制KC细胞的活性后,肝脏缺氧-复氧损伤的程度明显降低ebet真人 ,显示出KC在早期肝脏缺氧-复氧损伤中的重要作用。与2MAC异氟烷具有相似的作用凤凰彩票app ,因此我们认为异氟烷的保护作用可能与抑制KC活性有关。近期研究发现,吸入麻醉药可抑制蛋白激酶C(PKC)的活性[5],而PKC-NADPH氧化酶途径是KC产生细胞外O2-的关键途径[6,7],因此异氟烷通过抑制KC中的PKC介导的信号通路,可以减少O2的产生并抑制肝脏的复氧损伤。有待进一步研究的直接证据。

[参考文献]

1 Jaeschke H,Anwar F.中性粒细胞和库普弗细胞诱导的大鼠肝脏氧化应激和缺血再灌注损伤。 Am J Phsiol,1991,260:G355-36 2.

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2曹云飞,于伟峰。异丙酚对中性粒细胞活性氧生成和细胞内游离Ca2 +浓度的影响。临床麻醉学杂志,2000,16(2):96-9 8.

3曹云飞,薛惠斌,于卫峰。异丙酚对红细胞自由基损伤的保护作用。临床麻醉学杂志,2000,16(2):90-9 2.

4 Stevensin GW,S厅,Rudnick ST等。氟烷麻醉可减少人单核细胞过氧化氢的产生:通过γ干扰素的活化来保护单核细胞。 Immunopharmacol Immunotoxicol,1987,9:489-51 0.

5 Slater ST,Cox KJA,Lombardi JV等。酒精和麻醉剂对蛋白激酶C的抑制作用。自然,1993,364:82-8 4.

6 Poole AW亚博lol ,Pula G,Hers I等。 PKC相互作用蛋白:从功能到药理学。药物科学进展,2004,25(1 0):528-53 5.

7 Grumont R,Lock P,Mollinari M等。丝裂原诱导的T细胞大小增加涉及Rel / NF-kappaB依赖性c-myc表达的PKC和NFAT激活。免疫,2004,21(1):19-3 0.